近几年，CAR-T细胞药物在血液肿瘤的治疗中取得了很好的疗效。CAR-T细胞是一种活的药物，鉴于其潜在的毒副作用，监测体内CAR-T的增殖必不可少。有数据表明，CAR-T的增殖能部分提示患者的最佳疗效、持续疗效、毒副反应的程度，其在体内的药代动力学数据也能为临床提供宝贵的信息。

目前有3种方式可以检测CAR-T在体内的药代动力学：ddPCR、qPCR和流式细胞术。ddPCR与qPCR通过定量检测全血细胞提取的DNA中CAR的拷贝数来反映CAR-T细胞在体内的增殖情况，其中ddPCR利用油包水原理，将PCR反应体系分成很多的液滴，在每一个液滴里单独进行扩增，通过检测每个液滴内的荧光信号，利用泊松分布的特点，计算出绝对的拷贝数；qPCR则是通过与标准曲线进行比较来定量。而流式细胞术检测的是样本中表达某个抗原的细胞的比例，其原理为，使用带有荧光素的抗体来标记细胞上的相应抗原，通过流式细胞仪检测每一个细胞上的荧光信号来计算表达某特定抗原的细胞数量及比例。

在CAR-T的临床试验中，qPCR、ddPCR、流式细胞术常被用于CAR-T药代动力学检测。然而，针对这些检测的方法学研究还很少。近期，华中科技大学同济医学院附属同济医院血液内科朱莉教授团队报道了相关研究工作——流式细胞术检测Anti-CD19 CAR-T（CAR19 T）细胞的方法学研究，以及与ddPCR检测的对比分析。该项研究成果发表在专业杂志Cytometry Part A。

图片来源：论文截图

方法：商业化抗独特型抗体能够检测CAR19构建体上独特表位，使用该抗体，通过流式细胞术检测CAR19 T细胞，对其中重要性能参数，包括特异性、灵敏度、最低检测限进行分析，并进一步比较流式细胞术和ddPCR在188对临床样本和细胞系中检测结果的一致性。

结果：兔抗鼠FMC63单克隆抗体（R19M-AF647，星湾生物）流式检测CAR19阳性细胞具有高度特异性，cut-off值为0.05%。流式细胞术和ddPCR检测的结果在临床样本和细胞系中具有良好的相关性，当CAR19 T细胞占T淋巴细胞大于0.5%时，与ddPCR检测结果的相关系数为0.814。但随着CAR19阳性细胞丰度的降低，相关性降低，可能是由于在低比例下，ddPCR和流式细胞术的检测精度均有所降低。

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结论：流式细胞术作为CAR-T细胞回输后药代动力学检测方法之一，可以及时高效地反映患者体内CAR-T细胞的比例和数量，采用抗scFv特异性抗体在体内检测和定量CAR19 T细胞，较靶点蛋白及Protein L特异性更好，在检测CAR19 T细胞药代动力学方面与ddPCR 具有良好的一致性。

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为了精准检测CAR19 T细胞，本研究采用的是星湾生物（Bioswan Laboratories）自主研发的CAR流式检测产品——Rabbit Anti-Mouse FMC63 scFv Monoclonal Antibody, Alexa Fluor 647 (Cat: 200102)。

与Anti-CD19 CAR上的FMC63 scFv特异性结合，不识别其他CAR信号，专属性强。

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随着可检测的CAR阳性细胞被阴性细胞逐步稀释，实测CAR阳性细胞与理论值接近，该抗体准确度高。

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作为国内领先的聚焦细胞药物精准检测领域的企业，星湾生物建立了独有的CAR-drive抗体筛选平台，为客户提供高灵敏度、高准确性的专属检测产品，应用于细胞药物研发、生产质控和临床检测。